21 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Окраска по граму мокроты

ИССЛЕДОВАНИЕ МОКРОТЫ

Исследование мокроты предусматривает определение физи­ческих свойств мокроты, ее микроскопическое исследование в нативном мазке и бактериологическое исследование в окрашен­ных препаратах.

Мокроту, получаемую при откашливании утром до приема пи­щи, собирают в чистую сухую склянку. Перед исследованием боль­ной должен почистить зубы и тщательно прополоскать рот водой.

Мокроту помещают в чашку Петри, рассматривают на светлом и темном фоне, описывают ее свойства. Количество мокроты за сутки при различных патологических процессах может быть раз­лично: так например, при бронхите — скудное (5-10 мл), при абсцессе легкого, бронхоэктазах — большое количество (до 200—300 мл).

Деление на слои наблюдается в случаях опорожнения боль­ших полостей в легком, например, абсцесса легкого. В этом случае мокрота образует 3 слоя: нижний слой состоит из детри­та, гноя, верхний слой — жидкий, на поверхности его иногда имеется третий — пенистый слой. Такую мокроту называют трехслойной.

Характер: характер мокроты определяет содержание слизи, гноя, крови, серозной жидкости, фибрина. Характер ее может быть слизистый, слизисто-гиойный, слизисто-гнойно-кровянистый и т.п.

Цвет: зависит от характера мокроты, от выдыхаемых частиц, которые могут окрашивать мокроту. Так например, желтоватый, зеленоватый цвет зависит от наличия гноя, «ржавая» мокрота -от распада эритроцитов, встречается при крупозной пневмонии. Прожилки крови в мокроте или красная мокрота может быть при примеси крови (туберкулез, бронхоэктазы). Серый и черный цвет придает мокроте уголь.

Консистенция: зависит от состава мокроты, жидкая — в ос­новном от наличия серозной жидкости, клейкая — при наличии слизи, вязкая — фибрина.

Запах: свежевыделенная мокрота обычно без запаха. Непри­ятный запах свежевыделенной мокроты обычно появляется при абсцессе легкого, при гангрене легкого — гнилостный.

Нативные препараты готовят, выбирая материал из разных мecт мокроты, берут также для исследования все частицы, выде­ляющиеся окраской, формой, плотностью.

Отбор материала производят металлическими палочками, по­мещают его на предметное стекло и покрывают покровным. Мате­риал не должен выходить за покровное стекло.

Лейкоциты: всегда содержатся в мокроте, количество их зависит от характера мокроты.

Эозинофилы: распознаются в нативном препарате по более темной окраске и наличию в цитоплазме четкой, одинаковой, пре­ломляющей свет зернистости. Часто располагаются в виде больших скоплений. Эозинофилы встречаются при бронхиальной астме, других аллергических состояниях, гельминтозе, эхинококке лег­кого, новообразованиях, эозинофильном инфильтрате.

Эритроциты: имеют вид дисков желтого цвета. Единичные эритроциты могут встречаться в любой мокроте, в большом коли­честве — в мокроте, содержащей примесь крови: новообразовани­ях легкого, туберкулезе, инфаркте легкого.

Клетки плоского эпителия: попадают в мокроту из полости рта, носоглотки, большого диагностического значения не тлеют.

Цилиндрический мерцательный эпителий: выстилает слизистую оболочку гортани, трахеи, бронхов. В большом количестве обнаруживается при острых катарах верхних дыхательных путей, бронхитах, бронхиальной астме, новообразованиях легкого, пневмосклерозе и др.

Альвеолярные макрофаги: большие клетки различной величи­ны, чаще круглой формы, с наличием в цитоплазме включений черно-бурого цвета. Встречаются чаще в слизистой мокроте с небольшим количеством гноя. Обнаруживаются при различных па­тологических процессах: пневмонии, бронхитах, профессиональ­ных заболеваниях легких и др. Альвеолярные макрофаги, содер­жащие гемосидерин, старое название — «клетки сердечных поро­ков», имеют в цитоплазме золотисто-желтые включения. Для их выявления применяют реакцию на берлинскую лазурь. Ход реакции: кусочек мокроты помещают на предметное стекло, прибавляют 2 капли 5% раствора соляной КИОЛОТЫ и 1-2 капли 5% раствора желтой кровяной соли. Перемешивают стеклянной палочной и по-крывают покровным стеклом. Гемосидерин, лежащий внутриклеточно, окрашивается в голубой или синий цвет. Эти клетки обнару­живаются в мокроте при застойных явлениях в легких, инфарктах легкого.

Жирное перерождение клетки (липофаги, жировые шары): чаще округлые, цитоплазма их заполнена жиром. При прибавлении к препарату судана Ш капли окрашиваются в оранжевый цвет. Группы таких клеток встречаются при новообразованиях легкого, актиномикозе, туберкулезе и др.

Эластические волокна: в мокроте имеют вид извзитых блес­тящих волокон. Как правило располагаются на фоне лейкоцитов и детрита. Наличие их указывает на распад ткани легкого. Обнаруживаются при абсцессе, туберкулезе, новообразованиях легко­го.

Коралловые волокна: Грубые ветвящиеся образования с буг­ристыми утолщениями вследствие отложения на волокнах жирных кислот и мыл. Их обнаруживают в мокроте при кавернозном тубер­кулезе.

Обызвествленные эластические волокна — грубые, пропитанные солями извести палочковидные образования. Обнаруживают при распаде петрифицированного очага, абсцессе легкого, ново­образованиях, Элемента распада петрифицированнго очага носят название тетрады Эрлиха: I) обызвествленные эластические во­локна; 2)аморфные соли извести; 3) кристаллы холестерина; 4) микобактерии туберкулеза.

Спирали Куршмана_- уплотнены, закрученные в спираль слизевые образования. Центральная часть резко преломляет свет и выглядит спиралью, по периферии свободно лежащая слизь обра­зует мантию. Спирали Куршмана образуются при бронхиальной астме.

Кристаллические образования: кристаллы Шарко-Лейдена, вы­тянутые блестящие ромбы, можно обнаружить в желтоватых кусоч­ках мокроты, содержащих большое количество эозинофилов. Их образование связывают с распадом эозинофилов,

Кристаллы гематоидина: имеют форму ромбов и иголок золо­тистого цвета. Образуются при распаде гемоглобина при крово­излияниях, распаде новообразований. В препарате мокроты видны обычно на фоне детирита, эластических волокон.

Кристаллы холестерина: бесцветные четырехугольники с обло­манными ступенеобразным углом, обнаруживаются при распаде жирно перерожденных клеток, в полостях. Встречаются при туберку­лезе, абсцессе легкого, новообразованиях.

Пробки Дитриха: мелкие желтовато-серые зернышки с непри­ятным запахом, содержатся в гнойной мокроте. Микроскопически представляют собой детрит, бактерии, кристаллы жирных кислот в виде игл и капелек жира. Образуются при застое мокроты в полостях при абсцессе легкого, бронхоэктазах.

Исследование на туберкулезные микобактерии: Препарат готовят из гнойных частиц мокроты, высушивают

на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. Окрашивают по

Методика окрашивания: Реактивы:

I) карболовый фуксин,

2) 2% спиртовой раствор соляной кислоты,

3) водный раствор 0,5% метиленового синего.

1. На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают раствор карболового фуксина.

2. Препарат нагревают над пламенем горелки до появления паров, охлаждают и снова нагревают (так 3 раза).

3. С остывшего стекла снимают фильтровальную бумагу. Обесцвечивают мазок в солянокислом спирте до полного отхождения краски.

4. Промывают водой.

5. Докрашивают препарат метиленовнм синим 20-30 секунд.

6. Промывают водой и высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсионной системой. Туберкулезные микобактерии окрашиваются в красный цвет,

все остальные элементы мокроты и бактерии — в синий. Туберку­лезные микобактерии имеют вид тонких, слегка изогнутых пало­чек с утолщениями на концах или посередине.

При окраске по Цилю-Нильсону в красный цвет красятся также кислотоупорные сапрофиты. Дифференциальная диагностика туберкулезных микробактерий и кислотоупорных сапрофитов ведет­ся методами посева и заражения животных.

Исследование мокроты может проводиться также методом фло­тации. Метод Потенжера: ход исследования:

1. Свежевыделенную мокроту (не более 10-15 мл) помещают в узкогорлую бутылку, приливают двойное количество едкой ще­лочи, смесь энергично встряхивают (10-15 мин).

2. Приливают I мл ксилола (можно бензина, толуола) и около 100 мл дистиллированной вода для разжижения мокроты. Снова встряхивают 10-15 мин.

3. Доливают дистиллированную воду до горлышка бутылки и оставляют стоять на 10-50 мин.

4. Образовавшийся верхний слой (беловатый) снимают по каплям пипеткой и наносят на предметные стекла, предвари­тельно нагретые до 60°. Каждую последующую каплю наносят на подсохшую предыдущую.

5. Препарат фиксируют и красят по Цилю-Нильсону.

Исследование на другие бактерии:

Другие бактерии, встречающиеся в мокроте, например, стрептококки, стафилококки, диплобациллы и др. могут быть распознаны только методом посева. Бактериологическое иссле­дование препарата в этих случаях имеет только ориентировоч­ное значение. Препараты красят метиленовым синим, фуксином или по граму. Окраска по Граму: Реактивы: I) карболовый раствор генцианвиолета,

2) раствор Люголя,

4) 40% раствор карболового фуксина.

1. На фиксированный препарат кладут полоску фильтроваль­ной бумаги, наливают раствор генцианвиолета, красят 1-2 мин.

2. Бумажку снимают и препарат заливают раствором Люголя на 2 минуты.

3. Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до серого цвета.

4. Промывают водой и окрашивают 10-15 секунд раствором фуксина.

Мокрота;

Клинический анализ мокроты и бронхо-альвеолярной жидкости

Это патологическое отделяемое, выделяющееся с кашлем из органов дыхания при их заболеваниях.

Главные компоненты мокроты: слизь, серозная жидкость, клеточные элементы крови и дыхательных путей, фибрин, микробная флора.

Цель исследования мокроты: установить характер, локализацию, этиологию патологического процесса.

Требования к получению материала

Сбор материала: утро, после туалета полости рта. Получают мокроту путем откашливания, а не отхаркивания – в чистую сухую стеклянную широкогорлую банку или чашку Петри (в специализированных стационарах – в специальную плевательницу – градуированные стеклянные баночки с герметически закрывающимися крышками). Материал доставляют сразу, хранение нежелательно.

Читать еще:  Бронхолитики что это такое

Особенности работы с мокротой

С мокротой работают как с заразным материалом:

v Чашки с материалом не взбалтывать во избежание образования инфицирующих аэрозолей.

v Готовить и окрашивать препараты необходимо в вытяжном шкафу.

v Все манипуляции выполнять на специальном лотке (дезинфекция каждый день огнем либо хлорамином). Столы смачивать дезраствором на 6 часов, а затем промывать теплым содовым раствором.

v По окончании работы остатки мокроты слить в специальную посуду и обеззаразить сухой хлорной известью в соотношении 1:5 в течение 1 часа.

v Микроскоп протереть 70 0 спиртом.

Клинический анализ мокроты

Ø определение физических свойств

Ø микроскопия нативного материала и окрашенных мазков

Физические свойства мокроты

Количество мокроты – определяется в мерной стеклянной посуде. Небольшое — при острых воспалительных заболеваниях бронхов и легких.

Большое (200-300 мл) — из полостей в легочной ткани.

Расслоение мокроты при стоянии (следствие разницы в относительной плотности составных частей):

на 3 слоя – пенистый, серозный, гнойный — при гнилостном бронхите, гангрене легких, бронхоэктазах.

на 2 слоя — серозный, гнойный — при абсцессе легкого: верхний – серозный.

Определяют, располагая чашку с мокротой на белом фоне.

v Слизистая и серозная бесцветная или беловато-серая.

v Гнойная- зеленовато-желтая.

v Разные оттенки красного — при появлении крови.

v Ржавая — при крупозной пневмонии, туберкулезе легких с распадом, инфаркте легкого.

Консистенцию определяют с помощью препаровальной иглы над чашкой Петри.

v Мокрота почти вся тянется за иглой — консистенция тягучая (гной).

v Тянется в виде толстой нити – вязкая (слизь, гной).

v Тянется в виде тонкой и быстроотрывающейся нити — умеренно вязкая (слизь, гной).

v Не приподнимается над чашкой – студенистая (примесь фибрина).

v полужидкая и жидкая консистенция (серозная).

v Запаха обычно не имеет. Зловонный, гнилостный при задержке в бронхах и при распаде легочной ткани.

Определяется при осмотре, зависит от соотношения различных компонентов:

Ø кровянисто-слизистая и т д.

Преобладающий субстрат ставят на первое место.

Дополнительные признаки при осмотре мокроты

v Наличие патологических примесей (кусочки ткани при распаде злокачественной опухоли, рисовидные зерна при туберкулезе)

v спирали Куршмана (плотные извитые нити — при бронхиальной астме)

v пробки Дитриха — небольшие беловато-сероватые комочки, при раздавливании издающие зловонный запах — при хроническом абсцессе, бронхоэктатической болезни. Состоят из детрита, бактерий, жирных кислот, капелек жира.

v друзы актиномицетов — желтоватые зернышки в виде крупы — при актиномикозе

Включает изучение нативных и окрашенных препаратов.

Подготовка к исследованию: Узким шпателем или иглой выбрать кусочек величиной с булавочную головку →на предметное стекло, накрыть покровным стеклом (материал не должен выходить за пределы покровного стекла).

Ø под малым увеличением (7х8) – обнаружение элементов, встречающихся в мокроте в небольшом количестве (эластические волокна, спирали Куршмана и т.д.)

Ø под большим (7х40) — детальное исследование мазка. При необходимости окрашивания покровное стекло сдвигают, отмечают на предметном интересующее место, затем препарат высушивают и окрашивают.

N.B! Необходимо исследовать все частицы, отличающиеся от фона мокроты.

Элементы нативного препарата мокроты

v волокнистые образования

v кристаллические образования

Клеточные элементы нативного препарата мокроты

v Плоский эпителий – из полости рта. Единичный встречается всегда. Большое количество — примесь слюны. Диагностического значения не имеет.

v Цилиндрический мерцательный эпителий — эпителий слизистой оболочки бронхов и трахеи — в больших количествах при бронхиальной астме и остром бронхите.

Клеточные элементы нативного препарата мокроты (продолжение)

Лейкоциты —встречаются в любой мокроте. В слизистой мокроте — едининичные, а в гнойной -сплошь покрывают поле зрения.

Эритроциты — единичные в любой мокроте, в большом количестве в кровянистой мокроте при застое, инфаркте легких.

Альвеолярные макрофаги — при бронхитах, пневмониях и профессиональных заболеваниях легких (пылевые клетки — кониофаги), застойных явлениях в легких (сидерофаги – Мф, содержащие гемосидерин, определяют реакцией на берлинскую лазурь). пороках сердца.

Опухолевые клетки попадают в мокроту при распаде опухоли в бронхах.

Волокнистые образования в нативном препарате мокроты

Эластические волокна – элементы соединительной ткани. Следствие деструкции ткани. Имеют вид извитых, блестящих, тонких волокон. Обнаруживаются при туберкулезе, абсцессе, гангрене, новообразованиях.

Обызвествленные эластические волокна – грубые, толстые, пропитанные солями палочковидные образования — при распаде петрифицированного туберкулезного очага.

Спирали Куршмана –образуются при спастическом состоянии бронхов и наличии в них слизи. Во время кашлевого толчка вязкая слизь выбрасывается в просвет более крупного бронха, закручиваясь спиралью. Появляются при БА, бронхитах, иногда при опухолях легкого, сдавливающих бронхи.

Кристаллические образования в нативном препарате мокроты

Кристаллы Шарко-Лейдена – образуются из распадающихся эозинофилов. Для выявления необходимо выдерживание мокроты в течение 24 часов. Встречаются при БА (и на высоте приступа и в межприступном периоде)., при глистных поражениях легких.

Кристаллы гематоидина – продукт распада гемоглобина. Образуются в глубине гематом и обширных кровоизлияний, в некротизированной ткани.

Кристаллы холестерина – образуются при распаде жироперерожденных клеток, при задержке мокроты в полостях — при туберкулезе, новообразованиях, абсцессе.

Тетрада Эрлиха – обызвествленный детрит, обызвествленные эластические волокна, кристаллы холестерина, микобактерии туберкулеза – при распаде обызвествленного первичного туберкулезного очага.

Окрашенные препараты мокроты

Приготовление: При необходимости окрашивания покровное стекло после микроскопии нативного препарата сдвигают, отмечают на предметном стекле интересующее место, затем препарат высушивают, окрашивают по Романовскому или Папенгейму.

Окрашенные препараты мокроты (продолжение)

Элементы окрашенных препаратов:

Нейтрофилы составляют основную массу лейкоцитов в окрашенном мазке. Могут быть дегенеративные — в гнойной мокроте.

Эозинофилы отдельные или скоплениями, сособенно при БА.

Гистиоциты встречаются постоянно в различных количествах.

Эпителиоидные клетки — клетки туберкулезной гранулемы — при туберкулезе, саркоидозе.

Клетки Пирогова-Ланхганса – гигантские многоядерные клетки, входят в состав туберкулезной гранулемы. В мокроте встречаются редко.

Плоский эпителий, эпителий бронхов, реснитчатые клетки, бокаловидные клетки – единичные.

Бактериоскопическое исследование мокроты

Ø микроскопия препаратов, окрашенных по Циль-Нильсену — для выявления микобактерий туберкулеза

Ø микроскопия препаратов, окрашенных по Граму — для изучения микрофлоры мокроты (стрептококки, стафилококки и т.д.).

Исследование мокроты на микобактерии туберкулеза

Три пробы мокроты:

1-через 1-2 часа после сна (под наблюдением медицинского работника).

2 – в тот же день через несколько часов после взятия первой пробы.

3- утром следующего дня.

Необходимое количество материала — 3-5 мл мокроты, мокроту откашливать из глубоких отделов легких!

Исследование мокроты на микобактерии туберкулеза (продолжение)

Подготовка препаратов: Выбрать плотные гнойные частицы мокроты из 4-6 разных мест, распределить по предметному стеклу тонким слоем (или растереть комочки между двумя предметными стеклами). Высушить на воздухе 15-30 мин, фиксировать над пламенем спиртовки.

Основные ошибки – слишком толстые препараты, плохая фиксация, фиксация плохо высушенных мазков, слишком длительная фиксация (обугливание мазков).

Окраска по Циль-Нильсену и микроскопия

Методика окрашивания (инструкция МЗ РБ): на мазки – фильтровальная бумага, сверху карболовый фуксин Циля → медленно нагреть над пламенем спиртовки до появления пара (но не закипания!) → выдержать 5 мин при комнатной температруе→ удалить фильтровальную бумагу → ополоснуть стекло под проточной водой до полного удаления краски → обработать 25% раствором серной кислоты до полного отхождения краски → смыть → фиксировать 96 0 этиловым спиртом 5 мин → промыть водой → докрасить 0,3% водным раствором метиленового синего 60 сек →промыть, высушить, микроскопировать.

Окраска по Циль-Нильсену и микроскопия (продолжение)

Микроскопия: Просмотр не менее 100 полей зрения под иммерсией. Если не обнаружены – еще 100 полей. В сомнительных случаях – весь мазок. Микробактерии окрашиваются в красный цвет (тонкие, слегка изогнутые палочки), остальные элементы мокроты и бактерии – в синий. Подсчитывают количество на 100 полей.

Выражение результата бактериоскопии

1-9 на 100 полей – указать число

После просмотра мазки обрабатывают толуолом или ксилолом для удаления иммерсионного масла. Мазки с обнаруженными микобактериями туберкулеза хранят в течение года.

Исследование мокроты методом флотации

Метод накопления (флотации) – метод Поттенджера — применяется при подозрении на туберкулезный процесс в легких после трехкратного отрицательного исследования мокроты на микобактерии туберкулеза обычным способом.

Методика — мокроту обрабатывают ксилолом или бензолом, встряхивают → возбудитель в связи с гидрофобностью всплывает с пеной →из пены готовят мазок и окрашивают по Цилю-Нильсену.

Микроскопия препаратов мокроты, окрашенных по Грамму

Используется для выявления другой бактериальной флоры в мазке. Грамположительные бактерии (стрептококки, стафилококки, пневмококки, дифтерийные палочки и др.) – фиолетового цвета.

Грам-отрицательные (диплобациллы Фридлендера — пневмобациллы, палочки брюшного тифа, катаральные микрококки и т.д.) – красного цвета.

Стрептококки (в виде цепочек), стафилококки (грозди винограда) – при гнойных заболеваниях легких. Пневмобациллы – при пневмониях и других легочных заболеваниях. Пневмококки – возбудители крупозного воспаления легких. Исследование по Граму имеет ориентировочное значение – далее следует делать посев.

Читать еще:  Средство от кашля лук с сахаром

Мокрота при различных заболеваниях

Слизисто-гнойная или гнойно-слизистая. Небольшое количество лейкоцитов, единичные эритроциты. В значительном количестве клетки эпителия бронхов. При хроническом – с дегенеративными изменениями.

Мокрота скудная, слизистая, вязкая, бесцветная. Много эозинофилов, единичные эритроциты, клетки эпителия бронхов, разное количество лейкоцитов, кристаллы Шарко-Лейдена, спирали Куршмана.

Мокрота при различных заболеваниях (продолжение)

Мокроты много (при прорыве в бронх), при стоянии расслаивается на 2 слоя. Микроскопия – лейкоциты, эритроциты, фибрин, эластические волокна (признак деструкции ткани легкого), кристаллы гематоидина, микробная флора.

Мокроты много с гнилостным запахом, расслаивается на 3 слоя. Микроскопия – много лейкоцитов в стадии распада, эластические волокна, кристаллы гематоидина.

Мокроты много по утрам (переход из лежачего положения), чаще гнойного характера, иногда с гнилостным запахом. Небольшое количество лейкоцитов, единичные эритроциты, пробки Дитриха. Эластических волокон не содержит.

Мокрота при различных заболеваниях (продолжение)

v в начальной стадии: мокроты мало – слизистая, вязкая с примесью отдельных гнойных комочков. Лейкоцитов и альвеолярного эпителия мало. Микобактерий может на быть.

v в поздней стадии – обызвествленные эластические волокна, признаки казеозного распада (крошковатые белые массы), кристаллы холестерина, микобактерии.

Наиболее часто плоскоклеточный (45-60%), недифференцированный (20-40%), аденокарцинома (9-12%). В мокроте – клеточные элементы рака со слизью, гноем, кровью, комплексы атипичных клеток с признаками злокачественности.

Общеклиническое исследование бронхиального и бронхоальвеолярного смыва

Бронхиальный смыв: с помощью фибробронхоскопа вводят в просвет бронха 50 мл изотонического раствора хлористого натрия с последующей аспирацией. Бронхоаьвеолярный смыв: с помощью фибробронхоскопа катетер продвигают на 6-7 см внутрь сегментарного бронха, дробно вводя 4 порции по 50 мл изотонического раствора хлористого натрия с последующей аспирацией. Эти смешанные порции – бронхоальвеолярный смыв.

Исследование мокроты

Мокрота — это патологический продукт, выделяемый больным при различных заболеваниях дыхательной системы. Исследование мокроты позволяет определить степень выраженности патологического процесса и его остроту.

Мокрота может исследоваться:

1. Общеклиническими методами исследования.

2. Цитологическими методами.

3. Бактериологическими методами.

Общеклинические методы исследования

Собирание мокроты и ее хранение.

Мокроту собирают в чистую сухую посуду. Перед откашливанием больной должен прополоскать рот и зев водой и при сплевывании мокроты в баночку тщательно избегать загрязнения наружных стенок сосуда.

Исследованию подвергается мокрота, выделяемая в утренние часы, либо полученная за сутки, но сохраняемая до начала исследования в холодном месте.

а) суточное количество.

Объем выделенной мокроты определяют в стеклянной градуированной посуде. При абсцессе, гангрене, бронхоэктатической болезни выделяется большое количество мокроты (200-300 мл и более за сутки). При острых бронхитах за сутки выделяется 2-5 мл мокроты;

Гнилостный, гангренозный запах свежевыделенной и правильно собранной мокроты отмечается при абсцессе, гангрене и распаде злокачественной опухоли легкого. При других заболеваниях мокрота обычно запаха не имеет;

В зависимости от характера мокроты или примеси вдыхаемой пыли изменяется цвет мокроты. Серый или серовато-белый цвет характерен для слизистой мокроты, желтовато-серый — при гнойно-слизистой мокроте. Цвет мокроты зависит от стадии, формы и степени поражения легких;

г) характер мокроты зависит от состава мокроты. Она может включать слизь, гной, серозную жидкость, фибрин;

Мокрота может быть тягучей при примеси слизи, студенистой при наличии фибрина, умеренно вязкой или вязкой при примеси гноя, жидкой при наличии в ней серозной жидкости;

Обычно мокрота имеет комковатую или клочковатую форму, а при большом содержании слепков из альвеол с альвеолярными клетками — зернистую.

Доставленную мокроту выливают в чашку Петри и узким шпателем и иглой на черном и белом фоне отбирают из чашки Петри на предметное стекло все выделяющиеся по форме, цвету или плотности частицы мокроты.

Отобранный на предметное стекло материал покрывают покровным стеклом (24X24). Количество мокроты, взятой для исследования, должно быть небольшим, чтобы она не выступала из-под покрывного стекла. Приготовленный пативный препарат исследуют под малым (объектив 8х, окуляр 7х), а затем под большим (объектив 40х, окуляр 7х) увеличением микроскопа.

Окрашивание препаратов осуществляется методами Панненгейма, методами Романовского, методами Панаииколау, методами по Граму, методами Циля — Нильсена.

Окраска по Панненгейму

Сухие нефиксированные мазки помещают в контейнер и опускают в кювету с раствором красителя — фиксатора Май-Грюнвальда на 5 минут, после чего контейнер с мазками, ополаскивают в кювете с дистиллированной водой и помещают в кювету с рабочим раствором красителя Романовского на 8-15 минут. Затем смывают краситель водопроводной водой и высушивают мазки.

Окраска по Граму

Высушенный на воздухе препарат фиксируют — медленно проводят 3-4 раза над пламенем горелки. Затем на фиксированный препарат, покрытый полоской фильтровальной бумаги, на 3-5 мин. наливают раствор геициалвиолета. Бумажку удаляют и на 3-5 мин. заливают препарат раствором Люголя. Далее раствор Люголя сливают и промывают спиртом, докрашивают рабочим раствором Фуксина. После этого препарат промывают водой, высушивают на воздухе и исследуют под микроскопом с иммерсионной системой.

Бактерии, окрасившиеся при окраске по Граму в синий цвет называются грамположительными, в красный — грамотрицательными.

Окраска по Цилю-Нильсену

Высушенный на воздухе и фиксированный над пламенем горелки препарат мокроты покрывают кусочком фильтровальной бумаги и заливают карболовым фуксином. Затем подогревают препарат над пламенем горелки до появления паров, охлаждают и снова подогревают (три раза), после чего дают остыть и удаляют фильтровальную бумагу. Далее препарат опускают в солянокислый спирт для обесцвечивания до полного отхождения краски и промывают водой, докрашивают метиленовым синим или пикриновой кислотой (0,25-0,5%-ным раствором) в течение 20-30 секунд. Затем препарат промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой, что позволит выявить бациллы Коха, поставить туберкулез бактериоскопически.

Препараты мокроты, окрашенные методами Панненгейма, Романовского, позволяют определить морфологические элементы, находящиеся в мокроте, что дает возможность идентифицировать бронхиты, пневмонии, абсцессы, бронхоэктатическую болезнь в зависимости от стадии воспаления и активности процесса.

Препараты мокроты, окрашенные методами Грама, позволяют идентифицировать бактериальную флору, а также необходимы при постановке актииомикоза.

Основые морфологические элементы мокроты

1. Окраска по Панненгейму и по Романовскому позволяет идентифицировать гранулоциты. Подсчет их ведется на 100 лейкоцитов (как в мазке крови). Большой процент эозинофильных гранулоцитов характерен для бронхиальной астмы и при эхинококкозе легких.

2. Эритроциты легочного происхождения наиболее часто встречаются при туберкулезе, актииомикозе, бронхоэктазии, раке и сифилисе.

3. Эпителий мокроты подразделяется на альвеолярный, цилиндрический и плоский.

4. Большое количество эластических волокон, содержащихся в мокроте, свидетельствует о воспалении или злокачественном новообразовании.

5. Фибрин также свидетельствует о воспалительном процессе.

6. Спирали Куршмана встречаются при различных бронхитах и особенно бронхиальной астме.

7. Кристаллы Шарко-Лейдена вместе с эозинофилами свидетельствуют о бронхиальной астме.

8. Кристаллы гематоидина встречаются при абсцессе, реже при гангрене легкого.

9. Кристаллы холестерина выявляются с большей частотой при новообразованиях, абсцессе, эхинококкозе.

10. Рисовидные зерна образуются в старых туберкулезных кавернах.

Среди морфологических элементов выделяют Тетраду Эрлиха, характерную для туберкулезного процесса, состоящую из четырех элементов:

а) обызвествленных эластических волокон,

б) обызвествленных частиц,

в) кристаллов холестерина,

г) туберкулезных бацилл — при туберкулезе.

11. Альвеолярные клетки встречаются в мокроте исключительно при воспалительных процессах в легком.

12. Пробка Дитриха — это нейтральный жир с иглами жирных кислот и детритом; встречается при абсцессах и бронхоэктатической болезни.

13. Жировые шары и жирнозернистые клетки встречаются при некротических процессах в легких: абсцессе, туберкулезе, актиномикозе, новообразованиях.

14. Клетки воспаления: гигантские многоядерные клетки, эпителиоидные, гистиоциты.

15. Клетки Пирогова-Лангханса входят в состав туберкулезной гранулемы.

16. Опухолевые клетки должны быть обязательно подвержены цитологическому исследованию. Некоторые морфологические элементы мокроты представлены на рис. 34, 35.

Паразиты в мокроте

— из отряда цепней (ленточные черви) семейства Taeniidae в мокроте можно обнаружить: крючья, сколексы и остатки стенки пузыря эхинококка (Echinococcus granulosis); а также элементы альвеококка (Alveococcus multicoculaliris);

— из класса трематод: семейства Paragomidae в легких может паразитировать Paragonimus westermeni, а также Thominx aerophilus, относящийся к семейству трематод.

Клинические проявления при парагоиимозе и томиксозе напоминают туберкулезный процесс;

— из класса нематод: наиболее часто встречается в легких личинка Ascaris lumbricoides и личинки апкилостоматид;

— из простейших в легких могут встречаться амебы: Entamoeba gingivalis, Entamoeba pulmonalis; жгутиковые — Trichomonas, а также Balantidium coli.

При бактериологическом исследовании окрашенных препаратов удается идентифицировать грибки, наиболее часто встречающийся лучистый грибок (Actinomyces); бациллы Коха; спирохеты — Spirochaetae vincenti (фузоспирилезиая флора); Spirochaetae costellanii; Spirochaetae interohaemorrhagiae.

Для дальнейшего идентифицирования бактериальной микрофлоры необходимо бактериологическое исследование.

Бактериологическому исследованию подвергаются: мокрота, промытые воды бронхов, пунктах инфильтрата или абсцесса легкого.

Читать еще:  Воспаление легких симптомы у новорожденных

Взятие материала: утреннюю мокроту, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную банку (чашку Петри). Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот кипяченой водой с целью механического удаления остатков пищи, слущенного эпителия и микрофлоры ротовой полости.

Материал асептически доставляют в лабораторию. Интервал между взятием материала и его посевом не должен превышать 1-2 часов.

Посев осуществляется на следующие питательные среды:

1) 5%-ный кровяной агар,

2) агар па переваре Хоттипгера,

3) желточпо-солевой агар,

4) шоколадный агар,

6) среда Сабуро, Среды обогащения:

Питательный бульон или 2%-ная иеитоипая вода. Сахарный бульон. Жидкая Сабуро.

Посев осуществляется количественными или полуколичественными методами в аэробных и анаэробных условиях.

Наиболее часто воспалительные заболевания легких обусловлены следующей флорой:

Streptococcus pneumoniae и др.^герпуЬсоссоз aureus и др.? Micrococcus, Neisseria , Haemophilus influenzae, Listeria monocytogenes, Corynebacterium sp.,Klebsiela и др., Pseudomonus aerusinosa и др., Е. Coli,Citrobacter sp.,Profeus sp. и др.,Actinomyces.

При направленном исследовании, используя специальные среды и методы, могут быть выделены бактериологически Mycobacterium tuberculosis и другие микробактерии, Bacteroides, Micoplasma.

При подозрении на коклюш и паракоклюш посев производят на среду КУА (казеиново-угольный агар) анаэробно кашлевым или петлевым методами. При этом материал должен доставляться в лабораторию немедленно после его взятия в специальных транспортных термосах (при 37° С).

При оценке степени микробной обсемененности при количественном методе посева (титрованием) учитывается не только количество выросших колоний, а также их ассоциации.

1 степень — очень скудный рост (до 10 колоний)

2 степень — скудный рост (10-25 колоний)

3 степень — умеренный рост (не менее 50 колоний)

4 степень — обильный рост (сплошной рост)

Третья и четвертая степени роста обычно свидетельствуют об этиологической роли данного микроорганизма, первая и вторая степени — о носительстве или контаминации.

Совокупность клинических, цитологических и бактериологических методов исследования дает полную клинико-диагностическую картину патологического процесса в легких. Правильный забор, транспортировка, хранение и соблюдение техники исследования позволяют улучшить качество лабораторных видов исследования.

Бактериоскопическое исследование мокроты

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Предметные и покровные стекла.
  2. Шпатели и иглы.
  3. Смесь Никифорова.
  4. Газовая или спиртовая горелка.
  5. Пастеровская пипетка с резиновым баллончиком.
  6. Водяная баня с мостиком.
  7. Иммерсионное масло.
  8. Микроскоп.
  9. Фильтровальная бумага.
  10. Пинцеты Корне.
  11. Бумажки Синева.
  12. Основной фуксин.
  13. 96° этиловый спирт.
  14. Фенол.
  15. Глицерин.
  16. Концентрированная соляная кислота.
  17. Метиленовая синька.
  18. Дистиллированная вода.
  19. Генцианвиолет.
  20. Реактив Люголя.
  21. Едкий натр (NaOH).
  22. Бензин или ксилол.

Приготовление препаратов для бактериоскопического исследования

Для бактериоскопического исследования готовят обычно два препарата: один для обнаружения микобактерий туберкулеза и другой для обнаружения прочих микроорганизмов. Для первого препарата отбирают те же частицы, которые были предназначены для микроскопии, для второго — гнойные частицы. Взятый материал распределяют по предметному стеклу до получения достаточно тонкой ажурной сеточки (материал на первом стекле распределяют на 2/3 его поверхности, на втором — в центре).

Оба препарата фиксируют троекратным проведением над пламенем горелки. Первый препарат окрашивают по Цилю — Нильсену, второй — по Граму.

Окраска препаратов для бактериоскопического ис¬следования по Цилю-Нильсену и Граму

Окраска по Цилю-Нильсену

Для окраски препаратов по Цилю-Нильсену необходимы следующие краски и реактивы:

  1. Фуксин Циля: основного фуксина 1 г, глицерина 4 капли, этилового спирта 96° 10 мл, карболовой кислоты (5% раствор фенола) 5 мл, дистиллированной воды 90 мл. К фуксину, помещенному в фарфоровую ступку, прибавляют глицерин, хорошо растирают, постепенно приливают карболовую кислоту, спирт и воду. Фильтруют.
  2. 3% раствор солянокислого спирта: 3 мл концентрированной соляной кислоты удельного веса 1,19 и 97 мл 96° этилового спирта.
  3. 0,2 % водный раствор метиленовой синьки — 1 г метиленовой синьки растворяют в 500 мл дистиллирован- вой воды.

Техника окраски . На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги (уже и короче предметного стекла), на которую наливают в избытке фуксин Циля. Затем препарат нагревают до появления паров (достаточно троекратно медленно провести его над пламенем горелки), дают ему остыть в течение 3-5 минут, сбрасывают с помощью пинцета бумажку, промывают препарат водой и наливают на него 3% раствор солянокислого спирта для обесцвечивания на 20 секунд. После этого препарат промывают водой и вновь повторяют обесцвечивание. Материал должен быть серовато-розового цвета. Затем на препарат на 20-30 секунд наливают 1: 500 водный раствор метиленовой синьки, краску сливают, препарат промывают водой и высушивают, установив в вертикальном положении на полоску фильтровальной бумаги.

Высушенный препарат рассматривают под микроскопом с иммерсией, с поднятым конденсором.

В препарате микобактерии туберкулеза (рис. 60) красного цвета, нежные, тонкие, слегка изогнутые, иногда зернистые. Иногда обнаруживают микобактерип туберкулеза в виде так называемых осколков (в составе тетрады Эрлиха).

Рис. 60. Микобактерии туберкулеза в мокроте. 1 — окраска по Цилю-Нильсену, 2 — в люминесцентном микроскопе.

Все остальные элементы, в том числе и другие микроорганизмы, окрашены в синий цвет. С целью обнаружения мпкобактерий туберкулеза препарат тщательно исследуют, продвигая от одного продольного края к другому и поперек мазка. Во всех сомнительных случаях рекомендуют обработать препараты жавелевой водой
Результат исследования оформляют, используя следующую формулировку: «микобактерип туберкулеза не обнаружены» или «микобактерип туберкулеза обнаружены», и отмечают приблизительное их количество, например, «единичные в препарате», «единичные в поле зрения» и т. д.

В настоящее время находит все большее распространение люминесцентный способ обнаружения микобактерий туберкулеза в мокроте. Микобактерип туберкулеза имеют золотисто-желтое свечение на черном фоне препарата (рис. 60, 2).

В тех случаях, когда количество микобактерий туберкулеза в мокроте незначительно, для их обнаружения применяют метод обогащения (флотация), который состоит в следующем. В бутылку с нешироким горлышком (емкостью 250 мл) помещают 12-20 мл мокроты, добавляют равный объем 0,5% раствора КОН и встряхивают 5-10 минут. Затем приливают около 10 мл дистиллированной воды и 0,5-1 мл бензина или ксилола, взбалтывают 10-15 минут и доливают дистиллированную воду гак, чтобы горлышко бутылки было заполнено. Смесь оставляют на 1-2 часа до образования на поверхности жидкости сливкообразного слоя. На два предметных стекла, заранее расположенных на мостике над водяной баней, нагретой до 60-65°, каплями, с помощью пастеровской пипетки, 5-6 раз наносят сливкообразный слой, каждый раз после подсыхания предыдущей капли. Мазки окрашивают фуксином Циля на водяной бане (без дополнительной фиксации) в течение 10 минут, промывают водой, 3-4 минуты обесцвечивают 3% раствором солянокислого спирта, вновь обмывают водой, докрашивают 0,2% водным раствором метиленовой синьки, высушивают и исследуют под микроскопом.

Окраска по Граму

Для окраски препаратов по Граму требуются следующие краски и реактивы:

  1. Разведенный фуксин Циля (фуксин Пфейффера): 1 часть фуксина Циля + 9 частей дистиллированной воды.
  2. Реактив Люголя.
  3. 1 % спиртовой раствор генцианвиолета — 1 г генцианвиолета растворяют в 100 мл 96° этилового спирта. Этот раствор краски можно заменить бумажкой, приготовленной по методу Синева (белую фильтровальную бумажку пропитывают 1% спиртовым раствором генцианвиолета, затем высушивают и разрезают на мелкие квадратики соответственно размеру мазка).

Техника окраски . На фиксированный препарат накладывают бумажку Синева и смачивают ее водой (при отсутствии бумажки Синева ее заменяют белой фильтровальной бумажкой, на которую наносят несколько капель 1% спиртового раствора генцианвнолета). Через 1-2 минуты бумажку сбрасывают и на препарат наливают 1-2 капли реактива Люголя. Через 1-2 минуты препарат обесцвечивают 1-2 каплями 96° этилового спирта до появления бледно-серой окраски материала, смывают водой, на 10-15 секунд наносят сруксин Пфейффера, после чего вновь смывают водой и высушивают. В препаратах могут быть обнаружены (рис. 61) стафилококки, стрептококки, диплококки, палочки Пфейффера, спирохеты Плаута-Венсана, актиномицеты и другие микроорганизмы.

Рис. 61. Различные микроорганизмы в мокроте: диплококки (1), палочки Пфейффера (2), стрептококки (3), стафилококки (4), диплобациллы Фридлендера (5), симбиоз Венсана (6), мицелий актиномицет (7).

Обеззараживание мокроты, посуды и предметов, бывших в соприкосновении с ней

После проведенного исследования мокроту сжигают или обеззараживают. Последнее достигается следующими способами: а) автоклавированием в течение одного часа при 1,5 атм.; б) кипячением в течение одного часа в 1-2% растворе соды; в) обработкой 5% раствором лизола, карболовой кислоты или смесью, состоящей из равных объемов 5% раствора хлорамина и 5% раствора сернокислого аммония, в течение 12-24 часов. После обеззараживания посуду тщательно моют водой и высушивают.

Металлические предметы (шпатели, иглы) обеззараживают прокаливанием над огнем. Во избежание переноса микроорганизмов из одной порции мокроты в другую шпатель и иглу немедленно прокаливают после отбора соответствующих частиц.

Покровные стекла опускают в небольшую плоскую чашечку с 40% раствором серной кислоты на 12-24 часа. Затем кислоту сливают, а стекла неоднократно промывают водопроводной и дистиллированной водой. Вымытые стекла высушивают и используют для последующих исследований.

Ссылка на основную публикацию
Статьи c упоминанием слов:

Adblock
detector
×
×
×
×